多發(fā)性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）是血液系統(tǒng)的第二位常見(jiàn)惡性腫瘤，其腫瘤細(xì)胞起源于骨髓中的漿細(xì)胞，由骨髓漿細(xì)胞異常增生造成，多發(fā)于中老年人。此外，骨髓瘤的治愈率極低，絕大多數(shù)MM患者最終都會(huì)復(fù)發(fā)。多發(fā)性骨髓瘤患者會(huì)分泌一種具有個(gè)體特異性的高濃度免疫球蛋白-M蛋白，血液中M蛋白的濃度可以反映骨髓瘤患者的發(fā)病和治療情況。M蛋白序列具有個(gè)體異性，因而只有通過(guò)蛋白測(cè)序獲得其序列，才能實(shí)現(xiàn)真正的個(gè)性化監(jiān)測(cè)。

2024年1月，快序生物與中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所安剛團(tuán)隊(duì)在Clinical Cancer Research（IF=11.5）上合作發(fā)文“Monitoring minimal residual disease in patients with multiple myeloma by targeted tracking serum M-protein using mass spectrometry (EasyM)”。該研究在國(guó)內(nèi)首次證實(shí)EasyM蛋白質(zhì)譜技術(shù)可以識(shí)別MM患者血清M蛋白的特異序列，并將其作為MM特異性腫瘤分子標(biāo)記物進(jìn)行靶向定量追蹤，且具有與骨髓NGF檢測(cè)相比更優(yōu)的檢測(cè)靈敏度，為臨床微創(chuàng)監(jiān)測(cè)MM患者微小殘留病變（MRD）提供了一項(xiàng)新的選擇。

文中使用的EasyM技術(shù)是快序生物（Rapid Novor）歷時(shí)5年研發(fā)的成果，已經(jīng)拿到美國(guó)《臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正案》（Clinical Laboratory Improvement Amendments）認(rèn)證，可以作為獨(dú)立的第三方檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)給患者和藥企提供服務(wù)。

摘要

該研究以國(guó)家血液病縱向隊(duì)列-多發(fā)性骨髓瘤子隊(duì)列中56例新診斷MM患者為研究對(duì)象，使用EasyM蛋白質(zhì)譜技術(shù)分析了56例MM患者的447份血清樣本中的M蛋白。將EasyM技術(shù)與現(xiàn)有的MRD監(jiān)測(cè)技術(shù)相比，其中包括血清免疫固定電泳（IFE）、骨髓多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)（MFC）和二代流式細(xì)胞術(shù)（NFG），發(fā)現(xiàn)在其他檢測(cè)方式結(jié)果為陰性的時(shí)候，EasyM仍能在一些患者外周血清中檢測(cè)到殘存的M蛋白。表明EasyM是一種高度敏感的、微創(chuàng)的多發(fā)性骨髓瘤MRD監(jiān)測(cè)方法，可提前預(yù)測(cè)疾病的復(fù)發(fā)與進(jìn)展。

結(jié)果

1. EasyM血檢流程

EasyM多發(fā)性骨髓瘤血檢分為M蛋白測(cè)序和個(gè)性化監(jiān)測(cè)兩個(gè)階段：

第一階段：僅需采取患者外周血，使用蛋白質(zhì)譜對(duì)每一個(gè)患者血清中的M蛋白進(jìn)行測(cè)序。

第二階段：得到患者個(gè)體特異性的M蛋白序列后，從中篩選出克隆型肽段（M蛋白的CDR序列中含有至少一個(gè)突變的肽段，可作為MM特異性腫瘤分子標(biāo)記物），通過(guò)靶向蛋白定量的方法，可對(duì)病程各個(gè)階段的患者的血清M蛋白進(jìn)行精準(zhǔn)定量，追蹤其濃度變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)病情的監(jiān)測(cè)（圖1）。

2. EasyM追蹤檢測(cè)MM患者體內(nèi)M蛋白水平

在長(zhǎng)達(dá)兩年的時(shí)間跨度下，使用EasyM方法追蹤MM患者體內(nèi)M蛋白水平。與常規(guī)的血清檢測(cè)方法-血清蛋白電泳（SPEP）和血清免疫固定電泳（IFE），EasyM提供的M蛋白檢測(cè)靈敏度更高，可以更早、更準(zhǔn)確地檢測(cè)MM復(fù)發(fā)（圖2B）。在本次研究中，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，如果M蛋白連續(xù)兩次檢測(cè)翻倍，或者單次檢測(cè)增加3倍，可作為復(fù)發(fā)的指標(biāo)。如圖2B所示，臨床反應(yīng)評(píng)估顯示，患者29 （P29）在T7時(shí)仍處于完全緩解（CR）狀態(tài)，但是從T6到T7時(shí)間段, M蛋白明顯增加了3倍，提示有復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。而實(shí)際情況與EasyM預(yù)測(cè)的一致，P29患者在T7后4個(gè)月出現(xiàn)了疾病進(jìn)展（PD）。表明EasyM技術(shù)可以提前預(yù)測(cè)多發(fā)性骨髓瘤的復(fù)發(fā)。

3. MS-MRD與IFE、MFC-MRD和NGF-MRD方法比較

使用相同時(shí)間點(diǎn)采集的樣本進(jìn)行比較，MS-MRD與IFE相比，70.8%的樣本為MS-MRD和IFE雙陽(yáng)性，3.3%的樣本為MS-MRD和IFE雙陰性，25.7%的樣本為MS-MRD陽(yáng)性和IFE陰性，說(shuō)明MS-MRD的敏感性強(qiáng)于IFE。骨髓二代流式細(xì)胞術(shù)（NGF）作為MRD檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，在骨髓NGF檢測(cè)為陰性的樣本中，有81.8%的樣本為MS-MRD陽(yáng)性。計(jì)算結(jié)果顯示，MS-MRD與骨髓多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)（MFC）和骨髓NGF相比，敏感性均為100.0%，特異性分別為1.9%和22.2%（圖3B,C）。表明MS-MRD與這些檢測(cè)方式相比，也具有更高的敏感性和檢測(cè)MRD陽(yáng)性患者的能力。根據(jù)ROC曲線獲得定量cutoff值，設(shè)置M蛋白百分比小于1.86%作為cutoff值后，MS-MRD的靈敏度和特異性都有相應(yīng)的提高。

4. MS-MRD對(duì)預(yù)后的影響

將56例患者分為MS-MRD陽(yáng)性組（n=19）和MS-MRD陰性組（n=37），計(jì)算每組的中位無(wú)進(jìn)展生存期（mPFS）和中位總生存期（mOS）。MS-MRD陽(yáng)性組和陰性組的mPFS分別為20.6個(gè)月和61.8個(gè)月（圖4A）。MS-MRD陽(yáng)性組的mOS為55.7個(gè)月，MS-MRD陰性組的mOS未達(dá)到（圖4B）。上述結(jié)果顯示，MS-MRD陰性組的mPFS和mOS均明顯長(zhǎng)于MS-MRD陽(yáng)性組。

圖4. MS-MRD陽(yáng)性組和陰性組患者的PFS和OS

討論

該研究是國(guó)內(nèi)首次證實(shí)蛋白質(zhì)譜（MS）技術(shù)可以識(shí)別MM患者血清M蛋白的特異序列，并將其作為MM特異性腫瘤分子標(biāo)記物進(jìn)行靶向定量追蹤，且具有與骨髓NGF檢測(cè)相比更優(yōu)的檢測(cè)靈敏度，為臨床微創(chuàng)監(jiān)測(cè)MM患者微小殘留病變（MRD）提供了一項(xiàng)新的選擇，能提前發(fā)現(xiàn)骨髓瘤的復(fù)發(fā)。

關(guān)注點(diǎn)

文中使用的快序生物（Rapid Novor）旗下原研首創(chuàng)產(chǎn)品EasyM?，已經(jīng)正式通過(guò)了美國(guó)醫(yī)療保險(xiǎn)和醫(yī)療補(bǔ)助服務(wù)中心的嚴(yán)格審核，獲得臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正案（ Clinical Laboratory Improvement Amendments，簡(jiǎn)稱CLIA）認(rèn)證，可以作為獨(dú)立的第三方檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)給患者和藥企提供服務(wù)。

EasyM?是用于多發(fā)性骨髓瘤的一項(xiàng)創(chuàng)新血檢技術(shù)，主要通過(guò)外周血進(jìn)行多發(fā)性骨髓瘤MRD（微小殘留病變）的動(dòng)態(tài)序列監(jiān)測(cè)。相較于現(xiàn)有臨床使用的有創(chuàng)骨髓穿刺的血檢方法，EasyM?采取的無(wú)創(chuàng)血檢既減少了對(duì)患者造成痛苦的風(fēng)險(xiǎn)，其靈敏度也顯著提高。