摘要

大多數(shù)表達(dá)T細(xì)胞受體β鏈可變區(qū)（TCRVβ）的外周T細(xì)胞淋巴瘤（TCL），包括成人T細(xì)胞白血?。ˋTL）的患者預(yù)后差。人類的T細(xì)胞庫(kù)共有22個(gè)功能性TCRVβ亞基家族，TCL和ATL具有克隆性，腫瘤細(xì)胞通常表達(dá)單一的TCRVβ亞基，且在TCRVβ亞基家族的選擇方面沒(méi)有偏好。因此作者提出設(shè)想通過(guò)構(gòu)建靶向淋巴瘤相關(guān)TCRVβ克隆型的CAR-T療法，在最小限度影響正常TCR庫(kù)的前提下治療TCL。為了驗(yàn)證這一理論的可行性，作者使用了常規(guī)的T細(xì)胞和恒定自然殺傷性T細(xì)胞（iNKT）作為效應(yīng)細(xì)胞，并通過(guò)快序生物（Rapid Novor）的REmAb抗體從頭測(cè)序服務(wù)，測(cè)得了靶向不同TCRVβ亞基的抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)的精確氨基酸序列用于CAR的設(shè)計(jì)。這些抗TCRVβ的CAR-T細(xì)胞可以在選擇性殺死對(duì)應(yīng)癌細(xì)胞的同時(shí)，較好地保留正常生理TCR庫(kù)的完整性，從而保持機(jī)體免疫功能的相對(duì)穩(wěn)定。CAR-iNKT細(xì)胞對(duì)TCL和ATL也表現(xiàn)出了良好的殺傷作用和安全性，有望被開(kāi)發(fā)成現(xiàn)貨通用型免疫細(xì)胞治療方法。

圖1從頭抗體測(cè)序助力靶向TCRVβ的CAR-iNKT細(xì)胞構(gòu)建

結(jié)果

靶向不同TCRVβ的CAR構(gòu)建和驗(yàn)證

首先作者選擇了在健康捐獻(xiàn)者T細(xì)胞中較低表達(dá)的TCRVβ-1, Vβ-2, Vβ-9, Vβ-11，通過(guò)測(cè)序技術(shù)獲得了它們的特異性抗體序列用于CAR的設(shè)計(jì)（圖2A）。接下來(lái)通過(guò)慢病毒將四種CAR轉(zhuǎn)入健康捐獻(xiàn)者的PBMC T細(xì)胞中，對(duì)CAR-T的特異性殺傷作用進(jìn)行了評(píng)估。轉(zhuǎn)入四種CAR后，PBMC中表達(dá)對(duì)應(yīng)TCRVβ的CD3⁺ T細(xì)胞幾乎完全消失（圖2B）。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，這些CAR-T細(xì)胞也表現(xiàn)出了良好的特異性和活性。

圖2靶向TCRVβ的CAR的設(shè)計(jì)和功能驗(yàn)證

抗TCRVβ CAR-iNKT的構(gòu)建和抗腫瘤作用研究

然而自體CAR-T免疫療法可能受到成本和運(yùn)輸方面的挑戰(zhàn)，以及患者T細(xì)胞健康狀況不佳的限制。作者和其他團(tuán)隊(duì)的前期研究報(bào)道了CAR-iNKT作為現(xiàn)貨通用型同種異體免疫細(xì)胞治療方法的可行性。iNKT細(xì)胞是一種罕見(jiàn)的（占T細(xì)胞<0.1%），進(jìn)化上保守的T細(xì)胞亞群，具有先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的特征，且不會(huì)引起急性移植物抗宿主?。╝GVHD），因此適用于現(xiàn)貨通用型免疫療法的開(kāi)發(fā)。接下來(lái)作者便研究了構(gòu)建靶向TCRVβ的CAR-iNKT治療TCL的可行性。

在JRT3-T3.5細(xì)胞系中轉(zhuǎn)入不同TCRVβ基因后，抗TCRVβ1,2&9的CAR-iNKT細(xì)胞可以發(fā)揮對(duì)應(yīng)的顯著殺傷作用（圖3A）。CD4⁺和CD4^-的CAR-iNKT在被表達(dá)TCRVβ2的JRT3細(xì)胞刺激后不同程度引起IFNγ,TNFα和CD107a釋放增加（圖3B C）。在加入iNKT細(xì)胞激活劑α-半乳糖基神經(jīng)酰胺（aGalCer）后，CAR-iNKT的抗腫瘤作用增強(qiáng)（圖3D），表明恒定T細(xì)胞受體（iTCR）在CAR-iNKT細(xì)胞的抗腫瘤效果中發(fā)揮重要作用。接下來(lái)作者構(gòu)建了表達(dá)TCRVβ2的JRT3-T3.5 淋巴細(xì)胞小鼠腫瘤模型（圖3E），靶向TCRVβ2的CAR-iNKT細(xì)胞顯著抑制了腫瘤生長(zhǎng)（圖3F G）。此外作者也評(píng)估了抗TCRVβ CAR-iNKT細(xì)胞對(duì)ATL的作用，在特異性殺傷ATL的同時(shí)，該技術(shù)并不會(huì)損害細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞（CTL）針對(duì)病毒抗原的免疫力，或促進(jìn)人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒Ⅰ型（HTLV-1）的復(fù)制活性，這兩個(gè)是TCL和ATL治療中安全性考慮的重要因素。

圖3抗TCRVβ CAR-iNKT的體外和體內(nèi)抗腫瘤作用

關(guān)鍵點(diǎn)

1.文中作者構(gòu)建了抗TCRVβ的CAR-iNKT，證明了以TCRVβ克隆型為靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)現(xiàn)貨通用型的TCL療法的可行性。

2.作者通過(guò)快序生物的抗體測(cè)序技術(shù)獲得了靶向目的TCRVβ的特異性抗體序列，這為CAR-iNKT細(xì)胞的構(gòu)建和優(yōu)化提供了必要的序列信息。

3.文中提到人T細(xì)胞共有22個(gè)功能性TCRVβ亞基家族，其中約70%有可用的單抗，可供CAR-iNKT細(xì)胞的開(kāi)發(fā)?？煨蛏锬壳笆鞘澜缟衔ㄒ荒芡瓿蓜?dòng)物血清多抗直接測(cè)序的公司，使用我們的抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)可以直接而高效地從動(dòng)物甚至人血液中發(fā)現(xiàn)更多功能性天然抗體，助力免疫細(xì)胞治療方法的開(kāi)發(fā)。

參考文獻(xiàn)：
Rowan AG, Ponnusamy K, Ren H, Taylor GP, Cook LBM, Karadimitris A. CAR-iNKT cells targeting clonal TCRVβ chains as a precise strategy to treat T cell lymphoma. Front Immunol. 2023 Mar 2;14:1118681. doi: 10.3389/fimmu.2023.1118681. PMID: 36936927; PMCID: PMC10019783.