為什么需要抗體驗(yàn)證？

抗體是科學(xué)研究和醫(yī)藥研發(fā)中最廣泛使用和不可或缺的工具，而在抗體的制備，生產(chǎn)，和保存過(guò)程中，許多因素會(huì)影響到抗體的穩(wěn)定性和一致性（例如雜交瘤細(xì)胞死亡或變異，或抗體生產(chǎn)的批次間差異），導(dǎo)致其特異性發(fā)生變化，造成實(shí)驗(yàn)無(wú)法重復(fù)，因此，為了確保研究及治療的可重復(fù)性，進(jìn)行抗體驗(yàn)證十分必要。

如何進(jìn)行抗體驗(yàn)證？

抗體驗(yàn)證一般從鑒定抗體的特異性和一致性兩方面入手。 特異性是指抗體識(shí)別靶蛋白的能力，以及與靶蛋白的結(jié)合強(qiáng)度或親和力；抗體一致性則要求使用不同批次的同一抗體時(shí)能獲得相同的結(jié)果，即可重復(fù)性，抗體一致性也可通過(guò)抗體的序列保持不變來(lái)體現(xiàn)。

特異性測(cè)試

抗體驗(yàn)證中的特異性測(cè)試有多種方式：

1. 基因策略：利用CRISPR/Cas或RNA干擾（RNAi）等技術(shù)，將對(duì)照細(xì)胞或組織中的目標(biāo)基因敲除或敲低，然后使用特異性抗體測(cè)定目標(biāo)蛋白的熒光信號(hào)。

2. 正交策略：分別使用不依賴于抗體的方法（質(zhì)譜法），和基于抗體的方法（免疫印跡，Western blot）對(duì)樣品進(jìn)行定量，然后比較兩種定量間的相關(guān)性。

3. 獨(dú)立抗體策略：使用識(shí)別相同目標(biāo)蛋白表面不同抗原表位的2種或多種獨(dú)立抗體，并通過(guò)對(duì)比或定量分析確定特異性。

4. 標(biāo)簽蛋白表達(dá)：為內(nèi)源性目標(biāo)基因添加親和標(biāo)簽或熒光蛋白標(biāo)簽，分別使用識(shí)別標(biāo)簽與識(shí)別目標(biāo)蛋白的抗體進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)來(lái)自標(biāo)簽蛋白的信號(hào)進(jìn)行校正。

5. 免疫捕獲及質(zhì)譜分析IMS：首先免疫沉淀（IP）技術(shù)通過(guò)使用與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的抗體分離出來(lái)目標(biāo)蛋白，然后經(jīng)過(guò)質(zhì)譜分析，鑒定識(shí)別與抗體直接發(fā)生相互作用的目標(biāo)蛋白以及目標(biāo)蛋白-抗體復(fù)合物。

一致性（可重復(fù)性）測(cè)試

抗體的一致性測(cè)試有以下方式：

1. 使用表面等離子共振、免疫共沉淀等技術(shù)檢測(cè)抗體是否與目標(biāo)蛋白發(fā)生結(jié)合。

2. 通過(guò)抗體蛋白測(cè)序、肽圖分析、液相色譜或基因測(cè)序來(lái)檢測(cè)抗體序列是否保持不變。

其中，抗體蛋白測(cè)序是一種最直接有效的測(cè)序方法，該技術(shù)通過(guò)質(zhì)譜學(xué)的手段直接對(duì)抗體蛋白樣品進(jìn)行序列分析，得到全長(zhǎng)序列，研究人員可以使用它來(lái)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的肽圖分析和基因測(cè)序，更加快速且經(jīng)濟(jì)地驗(yàn)證抗體序列。

快序生物是全球抗體蛋白測(cè)序的領(lǐng)跑者，擁有成功測(cè)序數(shù)千例蛋白的經(jīng)驗(yàn)，提供100%序列覆蓋和準(zhǔn)確率的服務(wù)保障，讓您對(duì)您的抗體蛋白序列充滿信心，確保抗體的一致性。