近年來，相當(dāng)多的急性髓系白血病（Acute Myeloid Leukemia, AML）病人已經(jīng)可以通過化療和骨髓移植得到治療，但治療之后又復(fù)發(fā)的情況也時(shí)有發(fā)生，而這類復(fù)發(fā)的病人的預(yù)后普遍較差。因此，患者仍急需一種新的治療方法，而免疫療法則是目前為止最吸引人的一個(gè)。今天小編要介紹的論文就是從新抗原入手，研發(fā)了一種TCR-T的方法來治療AML。

文章摘要

30%-35%的急性髓系白血?。ˋML）患者的nucleophosmin 1 (NPM1）基因都帶有一種4bp的插入突變。該突變（ΔNPM1）會(huì)導(dǎo)致NPM1蛋白C端發(fā)生移框翻譯，并產(chǎn)生一個(gè)新的長度為11個(gè)氨基酸的肽段。NPM1是AML中一個(gè)必要的驅(qū)動(dòng)基因，因此這個(gè)新的肽段也被認(rèn)為是治療AML的理想靶點(diǎn)。通過免疫沉淀和質(zhì)譜鑒定，研究人員從AML病人的臨床樣品中鑒定到了一個(gè)來自于ΔNPM1的肽段（CLAVEEVSL）。研究人員利用該肽段與HLA-A*02:01組合成的復(fù)合物從健康個(gè)體中成功鑒定到了與之對(duì)應(yīng)的T細(xì)胞。其T細(xì)胞表面受體（TCR）進(jìn)而被克隆，并表達(dá)在CD8+ T細(xì)胞中。這種經(jīng)TCR轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞能夠有效的識(shí)別并消滅含有ΔNPM1突變的腫瘤細(xì)胞，其抗腫瘤作用在免疫缺陷的小鼠中也得到了證實(shí)?？偟膩碚f，CLAVEEVSL是一個(gè)來源于ΔNPM1的新抗原，基于此設(shè)計(jì)的TCR-T具有治療AML的廣闊前景。

實(shí)驗(yàn)流程和結(jié)果

1.質(zhì)譜鑒定新抗原

1）通過免疫沉淀富集得到AML中與HLA I結(jié)合的肽段，并進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，最終鑒定到CLAVEEVSL，見下圖A和B；

2）經(jīng)驗(yàn)證CLAVEEVSL與HLA-A*02:01結(jié)合。

2.篩選對(duì)應(yīng)的T細(xì)胞

1）合成帶有肽段CLAVEEVSL的HLA-A*02:01的復(fù)合物，并利用它從健康個(gè)體中成功分離得到與之對(duì)應(yīng)的CD8+ T細(xì)胞；

2)  經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其中1A2號(hào)T細(xì)胞能夠高效的識(shí)別肽段CLAVEEVSL，而不識(shí)別對(duì)照組的肽段，見下圖C。

3.制備TCR-T細(xì)胞

1)  1A2號(hào)T細(xì)胞的TCR被測(cè)序，并被表達(dá)在從健康個(gè)體中分離得到的T細(xì)胞中；

2）經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，這些改造過的T細(xì)胞能夠準(zhǔn)確識(shí)別帶有肽段CLAVEEVSL的抗原呈遞細(xì)胞和含有ΔNPM1的AML腫瘤細(xì)胞，并釋放IFN-γ。

4.在老鼠體內(nèi)驗(yàn)證TCR-T的免疫療效

用上述經(jīng)過改造的T細(xì)胞治療老鼠體內(nèi)的AML腫瘤，效果顯著，見下圖D。

用更“快”的腫瘤新抗原質(zhì)譜鑒定技術(shù)

才能更快地研發(fā)TCR-T免疫療法

今天介紹的這篇文章利用質(zhì)譜鑒定腫瘤新抗原，然后利用新抗原與HLA I組成的復(fù)合物順利分離出與之對(duì)應(yīng)的T細(xì)胞，經(jīng)過基因測(cè)序找到TCR的序列，進(jìn)而將其表達(dá)在T細(xì)胞的表面，這種經(jīng)過改造的T細(xì)胞能夠有效的識(shí)別并消滅AML腫瘤細(xì)胞。整個(gè)過程可以歸納為三個(gè)步驟：質(zhì)譜鑒定；分離和鑒定T細(xì)胞；制備TCR-T并驗(yàn)證其活性（見上圖）。在第一步“質(zhì)譜鑒定”中，研究人員通過質(zhì)譜共分析了12份AML病人的樣品，最終鑒定到了5個(gè)候選肽段：VEEVSLRK，AVEEVSLR，CLAVEEVSL，AVEEVSLRK，CLAVEEVSLRK（見下圖）。其中只有CLAVEEVSL可以結(jié)合HLA-A*02:01，而HLA-A*02:01在50%的白種人中都有表達(dá)，因此研究人員最終選定CLAVEEVSL作為靶點(diǎn)制備TCR-T細(xì)胞，并在老鼠體內(nèi)驗(yàn)證了其抗腫瘤的活性。

這篇文章有兩個(gè)細(xì)節(jié)值得我們關(guān)注：

1. 新抗原的發(fā)現(xiàn)離不開質(zhì)譜鑒定技術(shù)

雖然NPM1基因序列上的突變?cè)缫烟矫?，但是這11個(gè)氨基酸的突變肽段是否能被遞呈到細(xì)胞膜表面仍是未知。本文通過質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)揭示了：1）該肽段確實(shí)能夠被遞呈，2）被遞呈的肽段共有5種不同的形式。這個(gè)例子說明：只有質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)才能準(zhǔn)確的，直接的鑒定到被遞呈到細(xì)胞膜上的肽段序列，而基因組測(cè)序技術(shù)則無法提供這個(gè)數(shù)據(jù)。

2. 文中的質(zhì)譜鑒定技術(shù)還不夠高效

如下圖所示，研究人員共分析了12份AML樣品，但只有其中兩份樣品（AML10197，AML3361）能夠鑒定到肽段CLAVEEVSL。而AML6395樣品中則沒有鑒定到任何來自于ΔNPM1的肽段（見下圖紅框）。同時(shí)，這12份樣品通過質(zhì)譜分析所得到的譜圖數(shù)也有很大的波動(dòng)（從524到12233不等）。因此我們有理由相信：一個(gè)更加穩(wěn)定，更加高效的質(zhì)譜鑒定技術(shù)平臺(tái)將會(huì)給研究人員帶來更多，更可信的新抗原序列。

我們上?？煨蛏锟萍加邢薰灸壳巴瞥隽艘惶?/span>更“快”的腫瘤新抗原質(zhì)譜鑒定技術(shù)服務(wù)。我們針對(duì)腫瘤新抗原的特征，優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)流程中的每一個(gè)細(xì)節(jié)，并將其整合成一套完整的操作流程。該服務(wù)能夠幫助客戶更“快”地鑒定腫瘤新抗原，進(jìn)而加快TCR-T的研發(fā)進(jìn)程。我們這項(xiàng)鑒定服務(wù)的優(yōu)勢(shì)如下：

1）更直接，我們不依賴于基因組測(cè)序結(jié)果，而是利用質(zhì)譜鑒定技術(shù)對(duì)肽段進(jìn)行測(cè)序；

2）更真實(shí)，我們不依賴于預(yù)測(cè)軟件，而是直接從細(xì)胞中提取與MHC I結(jié)合的肽段，這樣測(cè)得的數(shù)據(jù)更接近于細(xì)胞中真實(shí)的生理狀態(tài)；

3）更多樣，我們獨(dú)有的肽段從頭測(cè)序技術(shù)能夠鑒定到多種不同來源的突變肽段；

4）更靈活，我們提供弱酸洗脫（MAE）和免疫沉淀（IP）兩種肽段提取方案供客戶選擇?？蛻艨梢愿鶕?jù)樣品類型選擇最優(yōu)的肽段提取方式，以提高樣品的利用率。

更多精彩推薦：

1. 更“快”的腫瘤新抗原的質(zhì)譜鑒定技術(shù)概述

2. 如何才能更”快“的鑒定腫瘤新抗原？

3. 更“快”的腫瘤新抗原質(zhì)譜鑒定技術(shù), 加快雙特異性抗體的研發(fā)